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棕色固氮菌突变种(UW45、DJ54和DJ35)的缺失FeMoco钼铁蛋白的纯化、特性鉴定及结晶研究 | |
其他题名 | Studies on the purification, characterization and crystallization of FeMoco-deficient nitrogenase MoFe proteins from mutants (UW45, DJ54and DJ35) of Azotobacter vinelandii |
吕玉兵 | |
学位类型 | 硕士 |
导师 | 黄巨富 |
2002 | |
学位授予单位 | 中国科学院植物研究所 |
学位专业 | 植物学 |
关键词 | 棕色固氮菌突变种(UW45 DJ54和DJ35) nifB 的点突变 nifH和ΔnifE的缺失 固氮酶nifB- MoFe蛋白 ΔnifH MoFe蛋白和ΔnifE MoFe蛋白 MnFe蛋白和CrFe蛋白 活性 结晶 微重力 |
摘要 | 一.棕色固氮菌突变种UW45、缺失nifH(DJ54)和缺失nifE(DJ35)突变种的钼铁蛋白的纯化、特性鉴定及结晶研究 棕色固氮菌突变种UW45的菌体破碎后,所得粗提物经两次DEAE 52柱层析后得到部分纯的nifB- MoFe蛋白和Fe蛋白。再经Sephacryl S-300和 DEAE柱的进一步纯化,便使nifB- MoFe蛋白基本达到SDS凝胶电泳纯。SDS-PAGE结果表明,nifB- MoFe蛋白具有与野生型棕色固氮菌(OP)MoFe蛋白相同的亚基种类和组成。此粗提物可为用NMF抽提的 OP MoFe蛋白的FeMoco激活,所得Fe蛋白具有与OP Fe蛋白相似的互补活性,可使OP MoFe的比活性达到2192 nmol C2H2/min/mg蛋白。FeMoco可使无互补活性的 nifB- MoFe蛋白与nifB- Fe蛋白组成具有可观放氢活性的固氮酶,使FeMoco显出的比活性接近文献报道的还原乙炔的最高值。对nifB- MoFe蛋白的结晶及晶体生长进行了的研究,初步探讨了结晶溶液各组分的种类和浓度、结晶方法和实验操作等与能否出现晶体及晶体的数目、大小、质量、形状和出晶时间等的相互关系。在结晶实验时,一次就得到了国内外尚未报道的该蛋白的短斜四棱柱的棕色晶体。目前所得的最大的晶体的二维边长都为0.1mm。初步结果表明,这种晶体可能就是nifB- MoFe蛋白的晶体。 从棕色固氮菌突变种DJ54中得到了ΔnifH MoFe蛋白;并参与了棕色固氮菌突变种DJ35的ΔnifE MoFe蛋白的分离纯化,所用方法与nifB- MoFe蛋白的分离纯化相似。对这两种突变种蛋白的特性和结晶进行了初步研究。在结晶实验时,也是一次就得到了国内外尚未报道的ΔnifH MoFe蛋白和ΔnifEMoFe蛋白的晶体。 二.新型固氮酶MnFe蛋白和CrFe蛋白的特性与结晶研究 在已有的工作基础上,分离纯化了几批MnFe蛋白和CrFe蛋白,并用部分纯的nifB- Fe蛋白进行活性互补,分别测定了MnFe蛋白和CrFe蛋白的底物还原活性。不断优化MnFe蛋白和CrFe蛋白晶体生长条件,获得了晶质良好的MnFe蛋白和CrFe蛋白的较大晶体。 在2001年的“神舟2号”飞船搭载实验中,MnFe蛋白的出晶率达到100%,所获得的晶体也比地面对照略厚些。继续进行MnFe蛋白和CrFe蛋白的空间计划的地面匹配实验,以满足对蛋白质样品的要求,以保证宇宙飞船“神舟3号”的蛋白质搭载实验获得更好的结果。 |
页数 | 47 |
语种 | 中文 |
文献类型 | 学位论文 |
条目标识符 | http://ir.ibcas.ac.cn/handle/2S10CLM1/14034 |
专题 | 中科院植物分子生理学重点实验室 |
作者单位 | 中国科学院植物研究所 |
第一作者单位 | 中国科学院植物研究所 |
推荐引用方式 GB/T 7714 | 吕玉兵. 棕色固氮菌突变种(UW45、DJ54和DJ35)的缺失FeMoco钼铁蛋白的纯化、特性鉴定及结晶研究[D]. 中国科学院植物研究所,2002. |
条目包含的文件 | ||||||
文件名称/大小 | 文献类型 | 版本类型 | 开放类型 | 使用许可 | ||
200204.pdf(1450KB) | 学位论文 | 开放获取 | CC BY-NC-SA | 浏览 请求全文 |
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