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应用蛋白质组学方法研究盐角草(Salicornia europaea L.)的抗盐性-盐角草双向电泳体系的建立 | |
其他题名 | Study of salt tolerance in Salicornia europaea L. using a proteomic approach—Establishment of the two-dimensional electrophoresis system |
李肖芳 | |
学位类型 | 硕士 |
导师 | 李银心 |
2006 | |
学位授予单位 | 中国科学院植物研究所 |
学位专业 | 细胞生物学 |
关键词 | 蛋白质提取 双向电泳 酚 三氯乙酸 盐角草 |
摘要 | 盐角草(Salicornia europaea L.)是世界上最抗盐的高等植物之一。应用蛋白质组学方法对其抗盐性进行研究,对于我们理解植物抗盐机理和改进作物耐盐性都有重要意义。双向电泳是蛋白质组学的核心技术,样品制备是双向电泳的关键步骤。盐角草是一种聚盐的真盐生高等植物,其体内除含有多种次生代谢物质外还含有大量盐分,而盐离子的存在严重干扰等电聚焦的进行,其蛋白质提取较其他植物更为困难。因此,在进行蛋白质组学研究之前,有必要对其蛋白质提取方法进行摸索,建立一个高效的双向电泳体系。 比较了三氯乙酸/丙酮沉淀法(TCA)、三氯乙酸沉淀法(E-TCA)和酚抽法(Phe)三种方法对盐角草蛋白的提取效果。提取700mM处理2d的盐角草幼苗蛋白时,三种方法分别得到579,343和535个蛋白点;TCA和E-TCA法所得图谱均存在严重的横向纹理,Phe法所得图谱则背景干净,基本上没有纹理。说明Phe法不仅能很好地提取盐角草蛋白,而且能有效去除样品中的盐分。对200mM处理90d的盐角草蛋白的提取也证实了这一点。比较了不同沉淀剂对Phe法蛋白提取效果的影响,结果表明,甲醇不能代替乙酸铵甲醇溶液。对Phe法的提取液进行了改进,所得图谱背景更加清晰,蛋白点数增加。此外,还对聚焦时间,上样量和染色方法进行了改进优化,建立了盐角草双向电泳体系。 本研究表明,Phe法适合于盐角草双向电泳样品的制备,这为其他盐生植物以及嗜盐微生物蛋白质的提取提供了重要参考。 |
页数 | 50 |
语种 | 中文 |
文献类型 | 学位论文 |
条目标识符 | http://ir.ibcas.ac.cn/handle/2S10CLM1/14241 |
专题 | 中科院植物分子生理学重点实验室 |
作者单位 | 中国科学院植物研究所 |
第一作者单位 | 中国科学院植物研究所 |
推荐引用方式 GB/T 7714 | 李肖芳. 应用蛋白质组学方法研究盐角草(Salicornia europaea L.)的抗盐性-盐角草双向电泳体系的建立[D]. 中国科学院植物研究所,2006. |
条目包含的文件 | ||||||
文件名称/大小 | 文献类型 | 版本类型 | 开放类型 | 使用许可 | ||
2006034.pdf(2030KB) | 学位论文 | 开放获取 | CC BY-NC-SA | 浏览 请求全文 |
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